服务热线:18616635231

试剂耗材

增强型 ECL化学发光底物试剂盒

产品介绍【返回】

品牌: 炎熙
货号: ECL-N-100/500
数量: 大量
保质期: 1年
保存条件: 避光置于4 ºC
规格: 50mL/250ml
规格: 50mL 产品价格: ¥279.0
规格: 250ml 产品价格: ¥1089.0
试剂盒组成:
货号 组份 数量 价格
ECL-N-100 A 液 50mL 259元
B 液 50mL
说明书 1 份
ECL-N-500 A 液 250mL 1089元
B 液 250mL
说明书 1 份
 
 
储存:避光置于4 ºC保存,有效期一年。
 
一、产品简介
本试剂盒是非放射性发光系统,用于检测固定在膜上的蛋白或核酸,灵敏度高,背景低,最低检测灵敏度可达纳克(nanogram)级,适用于检测极微量的蛋白或核酸。发光信号较稳定,便于反复曝光操作。采用对碘苯酚作为发光增强剂,与普通 ECL 化学发光底物相比,可明显减少一抗和二抗的使用量。
 
二、原理:
增强型ECL化学发光底物试剂盒用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶(HRP)的抗体、抗原或者核酸。蛋白质或核酸在电泳后转移到印迹膜上,以HRP标记的抗体或探针结合膜上的目的蛋白或核酸,洗膜后置于本产品配制的ECL工作液中,室温孵育数分钟,HRP使工作液中的鲁米诺(Luminol)氧化并发光,试剂中添加的增强剂可以使得这种发光增强一千倍。此光经X光胶片或者电子装置感光记录下来,可清晰显示蛋白质或核酸条带。
 
三、产品优点:
纳克级灵敏度——高灵敏性,能快速检测广泛的蛋白范围,最低可检测几纳克(nanogram)的蛋白。
信号较稳定——发光时间长,能进行多次曝光,30min仍可保持约60%的发光强度。
信号强——发光信号比HRP-鲁米诺检测体系强一千倍。
稳定性高——试剂盒可在4度稳定存放一年。
节约抗体——需要更少(稀释更多)的一抗和二抗,节省抗体。
 
四、使用方法:
1. 印迹膜制备:执行常规电泳、转膜、HRP标记的抗体或者HRP标记的核酸探针孵育、洗膜;ECL工作液含有HRP催化的发光底物,检测系统必须基于HRP酶标记的抗体或者核酸探针。充分的洗涤对于降低背景非常重要,所有步骤均在室温下完成。
2. ECL工作液的配置:在使用前取等量A液和B液,混合均匀并尽快使用;将膜片置混合液中,于室温下孵育约1分钟,每平方厘米膜片至少使用0.1-0.2ml以覆盖全膜片,注意不要在膜片表面形成气泡。
3.蛋白或核酸信号显现:
1). 用平头镊钳住膜片,垂直置于吸水纸上以吸去过量试剂,仅留下少量液体覆盖表面,不可让膜完全干燥;
2). 将膜片置于保鲜膜上,吸附蛋白面朝上,小心赶尽气泡;
3). 用电子装置感光,或在暗室中用X光片曝光;
4). 根据信号的强弱适当调整曝光时间,也可选择不同时间多次曝光,以达最佳效果。
 
五、安全性:
无特殊毒性,按普通化学品处理。如果不慎与眼、皮肤和衣物接触,请立刻用大量清水冲洗。
 
六、注意事项:
1.由于不同品牌的抗体质量不同,以及抗体的保存条件和保存时间的不同,初次使用时建议对抗体用量进行优化,以取得最优效果。
2.勿将ECL化学发光底物试剂盒暴露在阳光或强光下,否则会导致其失活;建议保存在棕色瓶中,并避免长时间暴露在阳光下,实验室光照对试剂盒影响不大;除了X光胶片曝光和洗片处理外,所有步骤均不必在暗室中操作。
3.使用充足的洗涤缓冲液、封闭液、抗体稀释液和底物工作液去覆盖印迹膜,以确保印迹膜处于湿润状态;使用大量的封闭液和洗涤液能减少非特异性信号的产生。
4.使用前配制ECL工作液,体积足够覆盖膜片即可;取A液和B液时一定要用不同的枪头,互相污染可能导致缓慢失活;配制完毕建议立即使用工作液,室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低;弃去使用过的混合试剂。
5.印迹膜与ECL工作液孵育后约2 min时发出的光最强,然后随着时间的延长而缓慢减弱,至30min仍可保持约60%的光信号;蛋白点荧光较弱时可以适当延长曝光时间;使用过少的ECL工作液不利反应进行,为达节约目的可将膜剪小,但勿降低ECL工作液使用比例。
6.使用生物素/亲和素体系时,避免使用脱脂奶粉作为封闭液,因为脱脂奶粉中含有多种内源性生物素,容易产生非特异性信号。
7. 避免将多张膜置于同一个洗膜盒内洗膜,相互吸附或摩擦可能造成很深的背景。
8. 金属氧化物颗粒可能会造成膜上出现颗粒状斑点,避免使用带有锈迹的剪刀以及镊子,建议使用塑料的平头镊子。
9.叠氮化钠(NaN3)能抑制HRP活性,应避免使用NaN3,如必须使用,浓度不要超过0.01%。
10. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作;戴手套可以避免在膜上留下手印,保持膜的干净。
11.本产品仅供研究使用。
 

常见问题:
 
问题 可能原因 解决方案
胶片反相(白色条带,黑色背景)  
体系中HRP过量
 
将HRP标记物稀释10倍以上
印迹膜上出现棕色或黄色条带
膜在暗室中发光出强烈荧光
发光信号持续时间短于8小时
信号太弱或者无信号 体系中HRP过量,导致底物消 耗过快 将HRP标记物稀释10倍以上
抗原或抗体不足 提高抗原或抗体浓度
蛋白转移率低 优化电转条件
HRP或者底物活性太低 **参考下面的注释
 
 
 
 
背景过高
体系中HRP过量 将HRP稀释10倍以上
封闭不充分 优化封闭条件
封闭试剂不合适 更换封闭液
清洗不充分 延长清洗时间、次数及清洗的体积
胶片曝光过度 减少曝光时间
抗原或抗体的浓度过高 减少抗原或抗体的浓度
 
蛋白条带为点状
蛋白电转失败 优化电转条件
膜未平衡 按说明书将膜平衡
膜和胶片之间有气泡 曝光之前去除气泡
出现非特异性条带 体系中HRP过量 将HRP标记物稀释10倍以上
SDS引起的非特异性结合 Western blot 过程中避免使用SDS
                           **检测底物的活性:准备1-2mL超敏底物工作液,于暗室中加入1μL稀释的HRP结合物,工作液将会立马发出荧光,随后荧光淬灭。

点击关闭

  • 微博

    微信
关于我们
公司动态
细胞产品
建系细胞
原代细胞
实验用干细胞
质粒,载体
感受态细胞
试剂耗材
细胞培养试剂
胎牛血清Gibco,Hyclone,sigma
支原体检测与清除
试剂盒
外泌体研究
核酸提取
PCR及RT-PCR产品
抑制剂
其他
克隆载体及其相关产品
电泳相关产品
蛋白质研究相关
仪器设备
细胞电穿孔仪
离心机
移液器
耗材
技术服务
分子生物学技术服
细胞生物学技术服务
蛋白相关技术服务
病毒类技术服务
动物实验类技术服务
组织形态学技术服务
实验经验交流
联系我们
公司简介
联系方式
采购平台与展示渠道
人才招聘
pk拾官网 pk拾 pk拾 pk拾 pk拾计划 pk拾 北京pk拾 pk拾投注 pk拾 pk拾